ПРАКТИКУМ ПО БИОХИМИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ ПРОДУКЦИИ. Биохимия растений практикум
ПРАКТИКУМ ПО ФИЗИОЛОГИИ И БИОХИМИИ РАСТЕНИЙ
ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ... 3 ВВЕДЕНИЕ... 5
оглавление ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ... 3 ВВЕДЕНИЕ.... 5 Глава 1 ПРАВИЛА И МЕТОДЫ БИОХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ... 8 1.1. Правила техники безопасности при проведении исследований в биохимической лаборатории...10
ПодробнееА Н Н О Т А Ц И Я Р А Б О Ч Е Й П Р О Г Р А М М Ы
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» А Н Н
Химия биологически активных веществ
Федеральное агентство по образованию Российский химико-технологический университет им. Д.И. Менделеева «УТВЕРЖДАЮ» Ректор РХТУ им. Д.И. Менделеева В.А. Колесников 2008 г УЧЕБНАЯ ПРОГРАММА Химия биологически
Подробнеефизиологии и биохимии растений
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»
ПодробнееБЛОК 2 Клетка как биологическая система.
1. К макроэлементам относятся: БЛОК 2 Клетка как биологическая система. 1) кислород, углерод, водород, азот 2) кислород, железо, золото 3) углерод, водород, бор 4) селен, азот, кислород 1) 2. Органоид,
Отложенные задания (30)
Отложенные задания (30) Вставьте в текст «ДНК» пропущенные термины из предложенного перечня, используя для этого цифровые обозначения. Запишите в текст цифры выбранных ответов, а затем получившуюся последовательность
ПодробнееЛекция 5. Дыхание растений
Лекция 5. Дыхание растений Общая характеристика и этапы дыхания Дыхание представляет собой окислительный распад органических веществ, синтезированных в процессе фотосинтеза, протекающий с потреблением
ПодробнееТест по биологии Фотосинтез 9 класс
Тест по биологии Фотосинтез 9 класс 1. В ходе фотосинтеза образуются 1) белки 2) жиры 3) углеводы 4) нуклеиновые кислоты 2. В ходе фотосинтеза поглощается 1) энергия АТФ 2) энергия солнечного света 3)
10класс Биология погружение 3
10класс Биология погружение 3 Тема: Энергетический обмен. 1. Наибольшее количество энергии освобождается при расщеплении молекул 1) белков 2) жиров 3) углеводов 4) нуклеиновых кислот 2. В бескислородной
ПодробнееБИОХИМИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ. БЕЛКИ, ФЕРМЕНТЫ
Федеральное агентство по образованию Государственное оборазовательное учреждение высшего профессионального образования Ивановский государственный химико-технологический университет П.Б. РАЗГОВОРОВ, С.В.
ПодробнееПояснительная записка
Пояснительная записка Рабочая программа составлена на основе Государственного стандарта общего образования, а также программы курса химии для 8-11 классов общеобразовательных учреждений (автор О.С. Габриелян),
ТЕМА «Энергетический обмен»
1. К автотрофным организмам относят 1) мукор 2) дрожжи 3) пеницилл 4) хлореллу ТЕМА «Энергетический обмен» 2. В процессе пиноцитоза происходит поглощение 1) жидкости 2) газов 3) твердых веществ 4) комочков
ПодробнееБИОХИМИЯ. МАЛЫЙ ПРАКТИКУМ
МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РФ ФГБОУ ВПО «Алтайский государственный университет» Биологический факультет Кафедра экологии, биохимии и биотехнологии ШАРЛАЕВА Е.А., ВИСТОВСКАЯ В.П. БИОХИМИЯ. МАЛЫЙ ПРАКТИКУМ
Подробнее«Анализ продуктов питания»
БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ХИМИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ КАФЕДРА АНАЛИТИЧЕСКОЙ ХИМИИ ПРОГРАММА СПЕЦИАЛЬНОГО КУРСА «Анализ продуктов питания» ДЛЯ СТУДЕНТОВ 4 КУРСА СПЕЦИАЛЬНОСТИ «ХИМИЧЕСКАЯ ЭКОЛОГИЯ»
9 класс Биология П1 ПРОФИЛЬ.
9 класс Биология П1 ПРОФИЛЬ. Мономером ДНК является: Задание 1 нуклеозид нуклеотид глюкоза аминокислота Задание 2 Вторичная структура каждой т-рнк имеет не сколько петель благодаря тому, что соседние с
ПодробнееПекин июль Практический тест. Часть IV
СТРАНА: УЧАСТНИК: 16-я Международная Биологическая Олимпиада Пекин июль 2005 Практический тест Часть IV Общее предоставляемое время: 90 минут Загружено с сайта http://bioturnir.ru 43 16-я МБО - Практический
ПодробнееРАСТЕНИЕ И СТРЕСС Экзаменационные материалы
ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Уральский государственный университет им. А.М. Горького» ИОНЦ «Экология и природопользование»
Экологический практикум
А.Г. Муравьев, Н.А. Пугал, В.Н. Лаврова Экологический практикум Учебное пособие с комплектом карт-инструкций Допущено Министерством образования Российской Федерации Крисмас+ Санкт-Петербург 2012 1 ББК
Подробнее1. Пояснительная записка:
1. Пояснительная записка: Рабочая программа по биологии разработана в соответствии: С Федеральным государственным образовательным стандартом основного общего образования, утвержденный приказом Министерства
ПодробнееID_1064 1/5 neznaika.pro
1 Клетка, её жизненный цикл (множественный выбор) Ответами к заданиям являются слово, словосочетание, число или последовательность слов, чисел. Запишите ответ без пробелов, запятых и других дополнительных
Задания А36 по биологии
Задания А36 по биологии 1. Верны ли следующие суждения? А. Кроссинговер способствует сохранению наследственной информации при делении соматических клеток. Б. Геномные мутации ведут к возникновению наследственных
ПодробнееЭНЕРГЕТИЧЕСКИЙ ОБМЕН
ЭНЕРГЕТИЧЕСКИЙ ОБМЕН http://biochemistry.ru/biohimija_severina/b5873content.html (Биохимия. РАЗДЕЛ 6. Энергетический обмен-л.в. Авдеева, Н.А. Павлова, Г.В. Рубцова) ЗАКОНЫ БИОЭНЕРГЕТИКИ В.П.Скулачев http://www.pereplet.ru/nauka/soros/pdf/9701_009.pdf
Подробнееdocplayer.ru
Чупахина Г.Н. - Физиологические и биохимические методы анализа растений[c] Практикум (2000)
КАЛИНИНГРАДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ И БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
АНАЛИЗА РАСТЕНИЙ
Практикум
Калининград
2000
УДК 581.1:581.19 ББК 28.57
Ч92
Печатается по решению редакционно-издательскогоСовета Калининградского государственного университета.
Ч92 Физиологические и биохимические методы анализа растений: Практикум / Калинингр. ун-т;Авт.-сост.Г.Н. Чупахина. – Калининград, 2000. – 59 с.
В практикуме приведены авторские и адаптированные для анализа растительного материала методы определения аскорбиновой, дегидроаскорбиновой, дикетогулоновой кислот, рибофлавина, триоз, а также уже известные методы определения нуклеиновых кислот, неорганических полифосфатов, ферментов системы аскорбиновой кислоты и др.
Кроме этого включены некоторые табличные данные, часто используемые студентами при выполнении курсовых и дипломных работ.
Практикум предназначен для студентов, выполняющих курсовые и дипломные работы; может быть использован также аспирантами, преподавателями вузов.
УДК 581.1:581.19 ББК 28.57
Калининградский государственный университет, 2000
Учебное издание
ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ И БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ АНАЛИЗА РАСТЕНИЙ
Практикум
Автор-составительЧупахина Галина Николаевна
Редактор Л.Г. Ванцева Оригинал-макетТ.А. Гайдюковой
Изд. лиц. №020345 от 14.01.1997 г.
Подписано в печать 17.04.2000 г. Формат 60×901/16. Бумага для множительных аппаратов. Ризограф. Гарнитура “Таймс”. Усл. печ. л. 3,7.Уч.-изд.л. 2,4.
Тираж 120 экз. Заказ
Калининградский государственный университет 236041, г. Калининград, ул. А.Невского, 14
СОДЕРЖАНИЕ |
|
Количественное определение аскорбиновой, дегидроаскорбино- |
|
вой и дикетогуоновой кислот в растительных тканях . . . . . . . . . . . . . | 4 |
Колориметрическое определение аскорбиновой кислоты (по |
|
Г.Н. Чупахиной) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . | 7 |
Спектрофотометрическое определение аскорбиновой кислоты . . . | 9 |
Количественное определение аскорбиновой кислоты . . . . . . . . . . . | 10 |
Определение аскорбиновой кислоты . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . | 12 |
Определение аскорбиновой и дегидроаскорбиновой кислот (по |
|
Дж. Божику) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . | 16 |
Определение витамина С в окрашенных объектах (по Бекеру) . . . . | 18 |
Методика определения активности аскорбатоксидазы, полифено- |
|
локсидазы и пероксидазы (по Д.К. Асамову, С.Т. Рахимовой) . . . . . . | 19 |
Определение активности аскорбинатоксидазы . . . . . . . . . . . . . . . . | 21 |
Спектрофотометрическое определение активности аскорбинаток- |
|
сидазы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . | 23 |
Методы определения активности пероксидазы . . . . . . . . . . . . . . . . | 24 |
Спектрофотометрический метод определения активности цито- |
|
хромоксидазы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . | 27 |
Определение активности полифенолоксидазы . . . . . . . . . . . . . . . . . | 28 |
Определение глутатиона . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . | 30 |
Фотоколориметрический метод определения триоз в раститель- |
|
ном материале (по Г.Н. Чупахиной, М.В. Куркиной) . . . . . . . . . . . . . . | 32 |
Спектрофотометрическое определение восстановленного и окис- |
|
ленного рибофлавина (по Г.Н. Чупахиной, А.С. Гребенникову, | 34 |
Н.С. Лейба) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . | |
Спектрофотометрическое определение нуклеиновых кислот . . . . . | 36 |
Определение содержания неорганических полифосфатов (по |
|
Р. Лангену, Е. Лиссу; модификация И.С. Кулаева и др.) . . . . . . . . . . . | 38 |
Быстрое колориметрическое определение нитратов (по Д. Ка- |
|
тальдо и др.) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . | 41 |
. . |
|
Определение числа хлоропластов, количества клеток и их объема |
|
в фотосинтезирующих тканях . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . | 42 |
Получение альбиносных проростков ячменя (по Г.Н. Чупахиной) | 47 |
Определение влагоёмкости почвы . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . | 48 |
Статистическая обработка данных физиолого-биохимическихис- |
|
следований методом попарных сравнений . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . | 50 |
3
Приложение . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АСКОРБИНОВОЙ, ДЕГИДРОАСКОРБИНОВОЙ И ДИГЕТОГУЛОНОВОЙ КИСЛОТ В РАСТИТЕЛЬНЫХ ТКАНЯХ
Аскорбиновая кислота (АК) - легкоокисляемое соединение, окисление ее идет до дегидроаскорбиновой кислоты (ДАК), лактоновое кольцо которой легко гидролизуется с образованием кислоты с открытой цепью - дигетогулоновой кислоты (ДКГК).
Метод количественного определения данных кислот основан на взаимодействии 2,4-динитрофенилгидразинас ДАК и ДКГК с образованием в серной кислоте соответствующих азазонов. Азазоны ДАК и ДКГК дают красное окрашивание, используемое для фотометрического определения.
Для нахождения суммы всех кислот АК окисляют раствором 2,6- дихлорфенолиндофенола до ДАК и содержание восстановленной формы АК определяют по разности.
При раздельном определении ДАК и ДКГК смесь подвергают действию восстановителей, при этом восстанавливаться в АК может только ДАК. В.В. Соколовский, Л.В. Лебедева, Т.Б. Лиэлуп [1] в качестве восстановителя предложили использовать унитиол (димеркаптопропансульфонат натрия), что значительно упростило процедуру восстановления. При рH 7 унитиол в течение 10 минут восстанавливает ДАК в АК. Данные авторы описали методику определения АК, ДАК и ДКГК в животных объектах, описанный метод был несколько видоизменен для анализа растительного материала (Г. Н. Чупахина).
Реактивы
1. 2%-ныйраствор2,4-динитрофенилгидразинав 9 н. серной кислоте, содержащей 0,25% тиомочевины. Для приготовления 100 мл реактива рассчитать, какое количество концентрированной серной кислоты необходимо взять с учетом ее концентрации и плотности, чтобы конечный раствор был 9 н. Например, исходный раствор концентрированной серной кислоты 95,6% и плотность его 1,830. В этом случае необходимо взять 25,2 мл кислоты. В кислоте при нагревании или встряхивании растворить 2 г 2,4- динитрофенилгидразина, а затем 0,25 г тиомочевины. Полученный раствор смешать с нужным объемом воды, наливая кислотный раствор в воду так, чтобы конечный объем равнялся 100 мл. Раствор хранить в холодильнике не более одного месяца.
4
2.5%-наяметафосфорная кислота (хранить в холодильнике не более двух недель).
3.85%-ныйраствор серной кислоты (в 100 мл дистиллята влить 900 мл концентрированной серной кислоты).
4.2.10-3 М унитиол (0,84 мл5%-ногораствора ампулированного препарата в 100 мл фосфатного буфера 0,2 М, рH=7). Раствор хранить не более суток.
5.0,001 н. раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола(краска Тильманса). Хранить в темноте не более одной недели.
Ход анализа
Навеску листьев (около 0,5 г) залить в фарфоровой ступке 10 мл 5%- ной метафосфорной кислоты, растереть. Гомогенат количественно перенести в мерную колбу на 25 мл, объем довести до метки метафосфорной кислотой; после встряхивания центрифугированием отделить осадок (20 минут при 3000 об/мин).
Вдве градуированные пробирки с притертыми пробками налить по 1,5 мл полученной вытяжки и в одну из них прибавить по каплям 0,001 н. раствор 2,6-дихлорфенолиндофеноладо появленияслабо-розовогоокрашивания, устойчивого в течение 30 секунд.
Втретью пробирку налить 1,5 мл вытяжки, приготовленной на 2.10-3 М растворе унитола. Данная вытяжка готовится следующим образом: навеска листьев (около 0,5 г) растирается с раствором унитиола, переносится в мерную колбу на 25 мл, объем доводится до метки раствором унитиола, приготовленным на фосфатном буфере. Содержимое колбы встряхнуть, колбу поместить в холодильник на 10 минут - это время необходимо для восстановления ДАК в АК. Центрифугированием отделить осадок. Белки, находящиеся в вытяжке, осаждаются метафосфорной кислотой: к 16 мл центрифугата прибавить 4 мл5%-нойметафосфорной кислоты, выпавшие
восадок белки удалить центрифугированием (15 минут, 3000 об/мин).
Во все три пробирки прибавить по 0,5 мл 2,4-динитрофенилгидразинаи довести объем до 2,5 мл дистиллированной водой. Пробирки поместить в термостат на 20 минут при температуре 100оС. По истечении указанного времени пробирки перенести в ледяную баню и в каждую из них добавить по 2,5 мл (тремя порциями) серной кислоты.
Через час окрашенные растворы фотометрируют при длине волны 520 нм в кювете на 10 мм по сравнению с контрольным раствором, который готовится и обрабатывается как опытные, только вместо вытяжки используется раствор 5%-нойметафосфорной кислоты. По калибровочной
5
кривой определяют, какой концентрации кислоты соответствует данная оптическая плотность.
Содержание кислоты Х на 1 г навески определяется по формуле:
Х= 125,5Cn,
где С - концентрация раствора кислоты, соответствующая данной оптической плотности, мкг/мл;
n - навеска растительного материала, г;
25 - общий объем исследуемого раствора, мл; 1,5 - объем раствора, взятый для анализа, мл.
Количественное содержание кислот далее рассчитывается следующим образом. В пробирке с экстрактом, полученным с унитиолом, определяется только ДКГК, так как унитиол восстанавливает ДАК в АК, которая с 2,4-динитрофенилгидразиномне определяется. В данную величину необходимо ввести поправку на разбавление за счет использования метафосфорной кислоты для осаждения белков: полученный результат нужно увеличить на 20%.
Впробирке с кислотным экстрактом определяется ДАК и ДКГК, поэтому, вычтя из данной суммы количество ДКГК, найдём величину ДАК.
Впробирке с кислотным экстрактом, где АК была окислена
2,6-дихлорфенолиндофеноломдо ДАК, определяется сумма трех кислот (АК, ДАК и ДКГК). Зная значение ДАК и ДКГК, находим по разности величину АК.
Построение калибровочной кривой
Для построения калибровочной кривой готовят три раствора аскорбиновой кислоты в 5%-нойметафосфорной кислоте:
1-йраствор - 100 мг АК в 250 мл метафосфорной кислоты;2-йраствор - 0,5 мл1-гораствора + 9,5 мл метафосфорной кислоты;
3-йраствор - 0,5 мл2-гораствора + 4,5 мл метафосфорной кислоты. Определенные объемы1-гои2-горастворов (1 мл, 0,75 мл, 0,5 мл,
0,25 мл - 2-гораствора и 1 мл, 0,5 мл -3-гораствора), содержащие от 20 до 2 мкг АК, доводятся метафосфорной кислотой до 1,5 мл. В качестве контроля берется 1,5 мл кислоты.
Во все пробирки по каплям добавляется 0,001 н. раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола до появленияслабо-розовогоокрашивания, устойчивого в течение 30 секунд (АК перейдет в ДАК). Затем вносится по 0,5 мл раствора2,4-динитрофенилгидразинаи объем доводится до 2,5 мл дистиллированной водой. Дальше пробы обрабатываются по прописи, данной в разделе “ход анализа”.
6
С использованием показаний оптической плотности для растворов ДАК разной концентрации, полученных с помощью фотоэлектроколориметра, строится калибровочная кривая.
Литература
1. Соколовский В.В., Лебедева Л.В., Лиэлуп Т.Б.О методе раздельного опре-
деления АК, ДАК, и дикетогулоновой кислот (ДКГК) в биологических тканях. // Лабораторное дело. №3. 1974.
КОЛОРИМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АСКОРБИНОВОЙ КИСЛОТЫ
(по Г.Н. Чупахиной)
При количественном определении аскорбиновой кислоты в растениях широко распространенным методом титрования растительных вытяжек 2,6-дихлорфенолиндофеноломимеются некоторые трудности, связанные с определением конца титрования. Синяя краска2,6-дихлорфенолиндофенолвосстанавливается в бесцветное соединение присутствующей в растительной вытяжке аскорбиновой кислотой (реакция Тильманса) таким образом, что на одну молекулу аскорбиновой кислоты приходится две молекулы краски. Избыток краски в кислой среде обусловливает розовое окрашивание вытяжки, однако полученное окрашивание раствора нестабильно, интенсивность его все время уменьшается до полного исчезновения, поэтому результат титрования во многом зависит от времени титрования.
Предлогаемый нами метод основан на фотометрическом определении избытка 2,6-дихлорфенолиндофенолапосле восстановления определенной части его аскорбиновой кислотой. Оптическая плотность окрашенного раствора измеряется с помощью фотоколориметра строго через 35 секунд после добавления в растительную вытяжку краски, что дает возможность полностью исключить ошибки, возможные при титрационном определении аскорбата.
Ход определения
Для количественного определения восстановленной аскорбиновой кислоты берется навеска свежего растительного материала – около 2 граммов. Навеска измельчается ножницами из нержавеющей стали, так как следы тяжелых металлов способствуют окислению аскорбиновой кислоты. Измельченный материал заливается 10 мл 2%-нойметафосфорной кислоты и быстро растирается. Гомогенат количественно переносится в мерную колбу на 100 мл, объем доводится до метки раствором2%-нойметафосфорной кислоты, которая является одним из лучших стабилизаторов аскорбиновой кислоты в растворе, к тому же она осаждает белки. Содержание колбы встряхивается, фильтруется или центрифугируется. Из фильтра-
7
та берется три пробы по 10 мл. К каждой пробе добавляется по 1 мл свежеприготовленного 0,025%-ногораствора2,6-дихлорфенолиндофенола.
Для приготовления раствора краски берётся 0,0625 г 2,6- дихлорфенолиндофенола, навеска переносится в мерную колбу на 250 мл, куда приливается 150-200мл теплой дистиллированной воды и 6 капель 0,01 н. щелочи. Колба встряхивается в течение10-15минут до полного растворения краски; после того как содержимое колбы примет комнатную температуру, раствор доводится до метки водой и взбалтывается.
Как только к пробе прилита краска, включается секундомер. Растительная вытяжка с краской хорошо перемешивается, раствор заливается в кювету толщиной 10 мм. Кювета вставляется в держатель кювет колориметра, нулевая точка которого предварительно устанавливается по 2%-нойметафосфорной кислоте. При колориметрировании вытяжки с краской необходимо стрелку гальванометра постоянно подводить к нулю, пока не пройдет 35 секунд, так как интенсивность окраски раствора все время уменьшается. Этого времени достаточно, чтобы выполнить вышеописанные операции. Фотометрирование ведется при 530 нм (зеленый светофильтр). Параллельно колометрируется 10 мл2%-нойметафосфорной кислоты с 1 мл краски (контроль). Изменение в интенсивности окрашивания контрольного и опытного образца пропорционально количеству аскорбиновой кислоты, находящемуся в растительной вытяжке. Расчет производится по калибровочной кривой.
Для построения калибровочной кривой 100 мг аскорбиновой кислоты растворяется в 1 л 2%-нойметафосфорной кислоты. Из данного раствора готовятся разведения, содержащие 1, 2, 3 мкг и т. д. аскорбиновой кислоты в 1 мл. По разнице в колориметрировании раствора2%-нойметафосфорной кислоты и стандартных растворов строится калибровочная кривая.
В том случае, когда вытяжка растений содержит значительное количество аскорбиновой кислоты (около 700 мкг на 1 г), при добавлении 1 мл краски к 10 мл вытяжки краска полностью обесцвечивается аскорбиновой кислотой. В этом случае вытяжку необходимо разбавить вдвое 2%-нойметафосфорной кислотой и учесть это при расчете содержания аскорбиновой кислоты.
Вычисление результатов
Содержание аскорбиновой кислоты на 1 г исследуемого материала вы-
числяется по формуле: | X = | a V | мкг, | |
g | ||||
|
|
|
где а - содержание аскорбиновой кислоты в 1 мл вытяжки, найденное по калибровочной кривой в мкг;
8
V - объем экстракта, полученного из данной навески;g - навеска исследуемого материала в граммах.
Определение содержания аскорбиновой кислоты в растениях данным методом так же, как и титрационным, для некоторых объектов дает завышенные результаты по сравнению с хромотографическим определением, так как краской оттитровывается не только аскорбиновая кислота, но и некоторые близкородственные соединения, находящиеся в экстракте. Однако благодаря своей простоте, хорошей повторяемости результатов этот метод [1] может быть использован для массовых определений витаминной ценности растений, для сравнительного определения содержания аскорбиновой кислоты, а также для количественного определения аскорбиновой кислоты, выделенной хромотографическим методом.
Аскорбиновая кислота является легкоокисляющимся соединением. При количественном ее определении необходимо иметь в виду, что свет ускоряет окисление аскорбиновой кислоты даже в присутствии стабилизирующих веществ, поэтому все операции по растиранию, фильтрованию и колориметрированию лучше вести на неярком свету и по возможности быстро.
Литература
1. Чупахина Г.Н. Колориметрическое определение аскорбиновой кислоты // Специальный практикум по биохимии и физиологии растений /Под ред.
М.М. Окунцова. Калининград, 1981. С. 14-16.
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АСКОРБИНОВОЙ КИСЛОТЫ
За основу взят метод Hewitt E.J. и Dickes G.J. спектрофотометрического определения аскорбиновой кислоты (АК) [1]. Навеска растительного материала (1 грамм для проростков ячменя) гомогенизируется с 10 мл 2%-нойметафосфорной кислоты. Гомогенат переносится в мерную колбу на 50 мл. Объем доводится до метки2%-нойНРО3 и 0,21 М Na3PO4, взятыми в соотношении 3 : 2 (V/V , рН 7,3 - 7,4). Экстракт центрифугируется 15 мин при 3000 об/ мин, экстинция раствора измеряется на спектрофотометре при 265 нм против стандарта - вышеуказанных растворов НРО3 и Na3PO4, взятых в том же соотношении. Результаты вычисляются по формуле :
= экстинция при 265 нм колвомлмкМ коэффициентмолярнойэкстинции для АКпри 265 нм.
Коэффициент молярной экстинции для аскорбиновой кислоты при
265 нм и рН = 6,8 и выше равен 1,65 - 1,655.104 [1].
Микромоли переводятся в граммы по формуле: г = мкМ. Мм АК (176).
9
studfiles.net
Биохимия растений
белков, послужили важной методологической основой для ра˝звития новых наук — биохимической и молекулярной генетики˝, биоорганической химии, молекулярной биологии.
Биохимические исследования сыграли решающую роль в рас-
шифровке генетического кода и выяснении механизмов гене˝ти- ческих процессов. Ф. Крик, М. У. Ниренберг, Г. Маттеи, С. Очо˝а,
Х. Г. Корана и др. (1961—1965)в ходе оригинальных биохимических опытов показали, что каждый аминокислотный остаток, в˝хо-
дящий в структуру белка, кодируется в ДНК в виде кодонов, пр˝ед-
ставляющих собой сочетания из трех нуклеотидных остатко˝в, со-
единенных в определенной последовательности. |
| |
Усилиями | большой группы исследователей | (М. В. Хогленд, |
М. Мезельсон, | Р. У. Холли, А. Н. Белозерский, | А. С. Спирин, |
À. À. Áàåâ è äð.) â 1956—1967гг. выяснены первичная структура и
биологическая роль рибосомной, матричной и транспортной˝ РНК
(РНК — рибонуклеиновая кислота). В это же время Ф. Жакоб и˝
Ж. Л. Моно (1961) разработали теоретические основы регуляции˝ биосинтеза белков, а Ф. Крик, А. Корнберг, Дж. Кернс, И. Р. Ле˝г-
ман и др. выполнили работы по изучению механизма синтеза
ÄÍÊ.
В начале 1970-õгодов Х. Г. Корана синтезировал ген транспорт˝-
ной РНК, а Д. Балтимор, Х. М. Темин, П. Берг, П. Лобан, С. Коэн, Г. Бойер разработали ферментативные методы объединен˝ия
фрагментов ДНК и таким образом положили начало развитию
еще одного научного направления — генетической (генной˝) инже-
нерии, основной задачей которой является создание теорет˝ичес-
ких основ переноса природных или искусственных (полученн˝ых химическим синтезом) генов с целью направленного изменен˝ия генетических свойств организмов.
К концу XX в. биохимиками были решены многие проблемы, связанные с выяснением структуры, функций, механизмов син˝теза и превращений большинства веществ, участвующих в жизне˝деятельности организмов: углеводов, липидов, органических к˝ислот,
нуклеотидов, аминокислот, белков, нуклеиновых кислот, вит˝ами-
нов, гормонов и других регуляторов химических процессов в˝ организме, алкалоидов, гликозидов, терпеноидных, гидроаромати˝че- ских и фенольных соединений.
С использованием современных методов определены структ˝у-
ра, химический состав и биологические функции отдельных к˝ом-
понентов живого организма: органов, тканей, клеток, всех кл˝еточ- ных органелл и внутриклеточных мембранных комплексов. Зн˝а- чительные успехи достигнуты в разработке теории фермент˝атив-
ного катализа и регуляции химических процессов в организ˝мах
под действием аллостерических ферментов, гормонов и регу˝ля-
торных белков. В результате углубленного изучения ультра˝струк-
studfiles.net
ПРАКТИКУМ ПО БИОХИМИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ ПРОДУКЦИИ
ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ... 3 ВВЕДЕНИЕ... 5
оглавление ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ... 3 ВВЕДЕНИЕ.... 5 Глава 1 ПРАВИЛА И МЕТОДЫ БИОХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ... 8 1.1. Правила техники безопасности при проведении исследований в биохимической лаборатории...10
ПодробнееА Н Н О Т А Ц И Я Р А Б О Ч Е Й П Р О Г Р А М М Ы
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» А Н Н
ПодробнееХимия биологически активных веществ
Федеральное агентство по образованию Российский химико-технологический университет им. Д.И. Менделеева «УТВЕРЖДАЮ» Ректор РХТУ им. Д.И. Менделеева В.А. Колесников 2008 г УЧЕБНАЯ ПРОГРАММА Химия биологически
ПодробнееАктуальность данной программы
Интенсивная школа «Биохимия белков» Место проведения: г. Салехард МБОУ «СОШ 2» Дата проведения: 23.03-27.03.2017г. Количество часов: 12 часов Руководитель: Жукова Т.А. Кол-во обучающихся: 8 (МБОУ СОШ 2)
ПодробнееБИОХИМИЯ. МАЛЫЙ ПРАКТИКУМ
МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РФ ФГБОУ ВПО «Алтайский государственный университет» Биологический факультет Кафедра экологии, биохимии и биотехнологии ШАРЛАЕВА Е.А., ВИСТОВСКАЯ В.П. БИОХИМИЯ. МАЛЫЙ ПРАКТИКУМ
Подробнеебиохимия молока и молочных продуктов
К. К. Горбатова, П. и. гунькова биохимия молока и молочных продуктов Рекомендовано Государственным образовательным учреждением высшего профессионального образования «Московский государственный университет
ПодробнееОтложенные задания (30)
Отложенные задания (30) Вставьте в текст «ДНК» пропущенные термины из предложенного перечня, используя для этого цифровые обозначения. Запишите в текст цифры выбранных ответов, а затем получившуюся последовательность
Подробнее1.ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ УЧЕБНОЙ ПРАКТИКИ
1.ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ УЧЕБНОЙ ПРАКТИКИ Учебная практика для студентов 2 курса очной формы обучения или 3 курса очно-заочной формы обучения, обучающихся по специальности 020208 «Биохимия», является важной частью
ПодробнееТЕМА «Энергетический обмен»
1. К автотрофным организмам относят 1) мукор 2) дрожжи 3) пеницилл 4) хлореллу ТЕМА «Энергетический обмен» 2. В процессе пиноцитоза происходит поглощение 1) жидкости 2) газов 3) твердых веществ 4) комочков
ПодробнееЦикл трикарбоновых кислот
Цикл трикарбоновых кислот Кирюхин Д.О. АТФ цитоплазма гликолиз пируват глюкоза Цикл Кребса НАДН, ФАДН 2 митохондрия АТФ Окислительное фосфорилирование Кирюхин Д.О. Общая схема получения АТФ за счет распада
ПодробнееБИОХИМИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ. БЕЛКИ, ФЕРМЕНТЫ
Федеральное агентство по образованию Государственное оборазовательное учреждение высшего профессионального образования Ивановский государственный химико-технологический университет П.Б. РАЗГОВОРОВ, С.В.
ПодробнееХИМИЯ В ТАБЛИЦАХ И СХЕМАХ
Е.В. Савинкина Г.П. Логинова ХИМИЯ В ТАБЛИЦАХ И СХЕМАХ Справочное пособие 8 9 классы Издательство АСТ Москва УДК 373:54 ББК 24я721 С13 С13 Савинкина, Елена Владимировна. Химия в таблицах и схемах : справочное
Подробнее9 класс Биология П1 ПРОФИЛЬ.
9 класс Биология П1 ПРОФИЛЬ. Мономером ДНК является: Задание 1 нуклеозид нуклеотид глюкоза аминокислота Задание 2 Вторичная структура каждой т-рнк имеет не сколько петель благодаря тому, что соседние с
ПодробнееПРОГРАММА ПЕДАГОГИЧЕСКОМ ПРАКТИКИ
гчр ' Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения
ПодробнееПояснительная записка
Пояснительная записка Настоящая рабочая программа курса «Химия в жизни человека» внеурочной деятельности по общеинтеллектуальному направлению разработана в соответствии с действующими нормативно-правовыми
Подробнеефизиологии и биохимии растений
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»
Подробнее«Анализ продуктов питания»
БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ХИМИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ КАФЕДРА АНАЛИТИЧЕСКОЙ ХИМИИ ПРОГРАММА СПЕЦИАЛЬНОГО КУРСА «Анализ продуктов питания» ДЛЯ СТУДЕНТОВ 4 КУРСА СПЕЦИАЛЬНОСТИ «ХИМИЧЕСКАЯ ЭКОЛОГИЯ»
ПодробнееОглавление. От автора
Оглавление От автора ОБЩАЯ ХИМИЯ Глава 1. Основные понятия, определения и законы химии 1.1. Вещество, его физические и химические свойства 1.2. Физические и химические явления 1.3. Закон сохранения массы
ПодробнееПримерное тематическое планирование
Примерное тематическое планирование Базовый уровень образования 10 класс (2 ч в неделю, всего 70 ч; из них) урока Дата Название темы Название урока Характеристика основных видов деятельности ученика (на
Подробнее10класс Биология погружение 3
10класс Биология погружение 3 Тема: Энергетический обмен. 1. Наибольшее количество энергии освобождается при расщеплении молекул 1) белков 2) жиров 3) углеводов 4) нуклеиновых кислот 2. В бескислородной
ПодробнееМЕТАБОЛИЗМ УГЛЕВОДОВ
МЕТАБОЛИЗМ УГЛЕВОДОВ Поли- и олигосахариды в желудочнокишечном тракте под действием гликозидаз (гидролитические ферменты: амилазы, мальтаза, сахараза, лактаза и др.) расщепляются до моносахаридов и всасываются
ПодробнееЭлективный курс по химии класс
Элективный курс по химии 10-11 класс «Введение в биохимию пищевых продуктов» Пояснительная записка. Данный курс рассчитан на 34 учебных часа для учеников 10-11-х классов. Изучение курса дает возможность
ПодробнееВажнейшие липиды тканей человека реферат
Важнейшие липиды тканей человека реферат Переваривание, всасывание и промежуточный обмен липидов. Белковый, углеводный, жировой обмен организма человека. Нормы Состав, структура и ключевые свойства белков,
ПодробнееКЛАССИФИКАЦИЯ УГЛЕВОДОВ
КЛАССИФИКАЦИЯ УГЛЕВОДОВ Углеводы Углеводы - обширный класс органических соединений. В клетках живых организмов углеводы являются источниками и аккумуляторами энергии, в растениях (на их долю приходится
ПодробнееРабочая программа по химии 8 класс
Муниципальное бюджетное общеобразовательное учреждение средняя общеобразовательная школа 3 г.о. Подольск мкр. Климовск УТВЕРЖДАЮ Директор МБОУ СОШ 3 С.Г. Пелипака 2016 Рабочая программа по химии 8 класс
ПодробнееЭНЕРГЕТИЧЕСКИЙ ОБМЕН
ЭНЕРГЕТИЧЕСКИЙ ОБМЕН http://biochemistry.ru/biohimija_severina/b5873content.html (Биохимия. РАЗДЕЛ 6. Энергетический обмен-л.в. Авдеева, Н.А. Павлова, Г.В. Рубцова) ЗАКОНЫ БИОЭНЕРГЕТИКИ В.П.Скулачев http://www.pereplet.ru/nauka/soros/pdf/9701_009.pdf
Подробнееdocplayer.ru